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如何将目的基因导入受体细胞

2021.6.09
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xujinping

致力于为分析测试行业奉献终身

  目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程,称为转化。

  将目的基因导入受体细胞的方法有很多种,每种方法各有利弊,适用于不同的受体细胞,而将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法。

  农杆菌是一种很神奇的细菌,在自然界中它可以把自己的基因片段随机地插入到双子叶和裸子植物受伤部位的基因组中(近年来农杆菌介导法在单子叶植物也广泛应用),我们现在吃的红薯基因组中就有一段农杆菌的序列,说明转基因这事自然界本来就有。于是科学家就利用农杆菌的这个特点把我们想转的基因放到载体上,转到农杆菌里去,再让农杆菌把这些基因插入到植物中去。

  1.载体的农杆菌转化

  首先要向公司购买农杆菌菌种。

  导入方法和大肠杆菌大同小异,也要用到感受态,也要用热水浴,不同的是不放在冰上而要放到液氮里,最后再用加了抗生素的培养基培养上就ok了。

  2.农杆菌与植株共培养

  购买植物培养基。植物培养基和细菌培养基配方差异很大,需要的东西很多建议大家买配好的粉末自己加水用高压锅煮一下就可以了,1斤大概几十块钱,不贵。

  先把番茄叶子切成小块(器械要先灭菌),再用次氯酸和酒精把番茄叶子消毒,然后在农杆菌培养基中浸泡10到20分钟,最后把浸泡过的叶子放到植物生长培养基上培养。

  农杆菌侵染过的植物通过在不同的阶段用含有不同植物激素的培养基培养,刺激植物的脱分化,再分化,最后在透明的玻璃瓶子里长成完整的植株,最后再移栽到土地中栽种。

  3.转化植株的筛选

  利用目的载体添加的抗生素进行已成功转化的植株的筛选,根据说明添加浓度的抗生素。

  4.转基因作物栽培

  最后,我们把在培养基中已经长成型的转基因小苗移栽到土里,精细管理,悉心栽培,等到它们长大,能结出长型番茄的植株,就是最后我们转基因成功的植株。

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