相差光路比普通光学显微镜多了两个元件：环形光阑（annular diaphragm）和相位板 （annular phaseplate ）
环形光阑：位于光源和聚光器之间。不同的环状孔形成的光阑，它们的直径和孔宽是与不同的物镜相匹配的。由于透明圆环所成的像恰好落在物镜后焦点平面和相板上的共轭面重合。因此，未发生偏斜的直射光便通过共轭面。其作用是将直射光所形成的像从一些衍射旁像中分出来。
相位板：安装在物镜的后焦面处，相板装有吸收光线的吸收膜和推迟相位的相位膜。它除能推迟直射光线或衍射光的相位以外，还有吸收光使亮度发生变化的作用。
利用位相差聚光镜及内部位相环所构成的环状光圈，产生中空光锥通过聚光镜、穿过检体，经过物镜内的光延迟位环板而成，因检体折射指数不同，造成绕射光束与直射光束发生干涉作用，得到明暗对比的效果。调整位相差装置，先选择聚光镜上与物镜相同倍率之位相差环，所形成的亮环与物镜内的暗环配合，调整聚光镜上亮环，使之重叠即可。
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