1.消毒物品的初步处理
所有医疗器械、床单、衣服等。接触过病原微生物的，应当先用化学消毒剂消毒，然后再照常清洗。特别是传染病房使用的各种物品要严格控制，严格消毒后再进行清洗消毒。日常清洁时，用洗涤剂浸泡擦洗，去除物品上的油渍、血渍等污垢，然后用自来水冲洗。带有轴接头、齿槽和间隙的仪器和其他物品应尽可能打开或拆卸，并彻底清洗。洗涤后的物品应根据临床需要进行干燥和包装，以避免再次污染。清除污染前后的物品容器和运输工具应严格区分，防止交叉感染。
2.无菌物品的包装和容器应合适
包装用白色棉双层布，新布使用前应清洗去浆。货物要用绳子包装，不要太紧，也不要太松、太散。使用容器时，选择既能阻挡外界微生物入侵，又有良好蒸汽穿透性的容器，如注射器专用灭菌盒、敷料储存罐等。
3.消毒物品应合理包装
高压蒸汽灭菌器的内容物不应太拥挤，也不应超过锅的内容物。尽量同锅消毒类似物品。如果不同种类的物品包装在一起，应以物品消毒所需的温度和时间为准。装载物品时，应上下错开，留有空隙，便于蒸汽渗透。大消毒包放在上层，小消毒包放在下层。当布料和金属物品同时消毒时，应将金属物品放在下层，使其加热方式基本一致，并防止金属物品消毒时产生的冷凝水弄湿布料
4.排出空气
使用高压蒸汽灭菌器时，最重要的是排出锅内空气。如果锅内有空气，气压针指示的压力不是饱和蒸汽产生的压力。在相同压力下，蒸汽与空气混合产生的温度低于饱和蒸汽产生的温度。因此，锅内的空气被完全消除，从而锅内的所有水蒸气可以被完全消毒。常见的方法有：关闭放气阀，当压力升至0.05MPa时打开放气阀，待压力表指针归零后关闭放气阀。关闭阀门并重新通电后，当压力表升至0.1兆帕时，开始计时并保持压力指定时间。
5.合理计算灭菌时间
高压蒸汽灭菌器杀菌时间包括：渗透时间，从高压蒸汽灭菌器达到杀菌温度的时间到锅内最难的部位达到这个温度的时间；维持时间，即杀死微生物所需的时间，一般表示为杀死嗜热脂肪芽孢杆菌孢子所需的时间；安全时间，即增加灭菌所需的时间，一般是热死时间的一半，其长度取决于被灭菌的物品。易于导热的金属设备灭菌不需要安全时间。灭菌期间，注意观察压力表，保持规定压力，直到灭菌时间。在灭菌过程中，如果压力和温度下降，应再次升温，并重新计时。6.开盖操作
到了杀菌时间，可以切断电源，压力降到0.05MPa时，可以慢慢释放蒸汽。注意不要减压过快，会造成剧烈的减压沸腾，溢出容器内的液体。当压力降至零时，只能打开盖子，取出培养基放在平台上浓缩，不能长时间放气；否则，培养基的组成将容易改变，不能制成斜面培养基。如果高压蒸汽灭菌器锅炉内部产生负压，且由于长期不放气而无法打开盖子，可以打开放气阀让空气进入，内外压力平衡后再打开盖子。
6.灭菌后操作
要求灭菌物品干燥后检查指示剂，达到灭菌要求后即可出锅。取无菌物品时，应进行严格的无菌操作。打开物品时，先盖上盖子，并关闭储罐中的通气孔。同时要分类，按顺序分布。
7.防止过热蒸汽
过热蒸汽虽然温度较高，但和空气一样，遇到被灭菌物品时不能凝结成水，释放潜热，不利于灭菌。防止过热的方法是在使用外接蒸汽灭菌器时，不要使夹层温度高于消毒室温度，但两者应相似，不要使压力过高的蒸汽进入消毒室；灭菌时，不要用高压蒸汽加热至所需温度，然后降至常压。
8.高压灭菌后不会变质的物品
如无菌水、培养基、接种工具等，可以延长灭菌时间或增加压力。然而，培养基应严格遵守保压时间，保压时间不仅要彻底保压，还要防止培养基中的成分变质或降低其有效性。
9.其他人
1)当含盐液体泄漏或溢出时，必须及时擦拭干净，并彻底干燥盖子沿线的密封圈，否则会腐蚀容器和管道。
2)不要在爆炸性气体附近使用仪器。
10.不能使用高压蒸汽灭菌器消毒物品
不要使用高压蒸汽灭菌器对任何有破坏性的材料和含有碱金属的物质进行灭菌，否则会引起爆炸、衬里和内部管道腐蚀或垫片损坏。
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