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免疫胶体金技术的使用优点及颗粒制备

2021.10.14
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xujinping

致力于为分析测试行业奉献终身

  使用优点

  (1)使用方便快速,便于基层使用和现场使用,所有反应能在15分钟内完成;

  (2)成本低,不需要特殊的仪器设备;

  (3)应用范围广,可适应多种检测条件;

  (4)可嗄以进行多项检测,若阳性样本比较难获得,多项检测可以节省样品,降低成本;

  (5)标记物稳定,标记样品在4℃贮存两年年以上,无信号衰减现象;

  (6)胶体金本身为红色,不需要加入发色试剂,省却了酶标的致癌性底物及终止液的步骤,对人体无毒害。

  颗粒制备

  根据不同的还原剂可以制备大小不同的胶体金颗粒。常用来制备胶体金颗粒的方法如下。

  1.枸橼酸三钠还原法

  (1)10nm胶体金粒的制备:取0.01%HAuCl4水溶液100ml,加入1%枸橼酸三钠水溶液3ml,加热煮沸30min,冷却至4℃,溶液呈红色。

  (2)15nm胶体金颗粒的制备:取0.01%HAuCl4水溶液100ml,加入1%枸橼酸三钠水溶液2ml,加热煮沸15min~30min,直至颜色变红。冷却后加入0.1Mol/L K2CO30.5ml,混匀即可。

  (3)15nm、18nm~20nm、30nm或50nm胶体金颗粒的制备:取0.01%HAuCl4水溶液100ml,加热煮沸。根据需要迅速加入1%枸橼酸三钠水溶液4ml、2.5ml、1ml或0.75ml,继续煮沸约5min,出现橙红色。这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm、18~20nm、30nm和50nm。

  2.鞣酸—枸橼酸钠还原法

  A液:1%HAuCl4水溶液1ml加入79ml双馏水中混匀。

  B液:1%枸橼酸三钠4ml,1%鞣酸0.7ml,0.1Mol/L K2CO3液0.2ml,混合,加入双馏水至20ml。

  将A液、B液分别加热至60℃,在电磁搅拌下迅速将B液加入A液中,溶液变蓝,继续加热搅拌至溶液变成亮红色。此法制得的金颗粒的直径为5nm。

  3.制备高质量胶体金的注意事项

  (1)玻璃器皿必须彻底清洗,最好是经过硅化处理的玻璃器皿,或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃器皿,再用双馏水冲洗后使用。否则影响生物大分子与金颗粒结合和活化后金颗粒的稳定性,不能获得预期大小的金颗粒。

  (2)试剂配制必须保持严格的纯净,所有试剂都必须使用双馏水或三馏水并去离子后配制,或者在临用前将配好的试剂经超滤或微孔滤膜(0.45mm)过滤,以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。

  (3)配制胶体金溶液的pH以中性(pH7.2)较好。

  (4)氯金酸的质量要求上乘,杂质少。最好是进口的。

  (5)氯金酸配成1%水溶液在4℃可保持数月稳定,由于氯金酸易潮解,因此在配制时,最好将整个小包装一次性溶解。

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