微生物限度检查法的菌液制备

　　接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，培养18~24 小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24~48 小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数为50~100cfu 的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5~7 天，加入3~5ml 含0.05%(v/v)聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%(v/v)聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含孢子数50~100cfu 的孢子悬液。菌悬液在室温下放置应在2 小时内使用，若保存在2~8℃可在24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃，在验证过的贮存期内使用。适用性检查 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50~100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2 个平皿，混匀，凝固，置30~35℃培养48 小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50~100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23~28℃培养72 小时，计数；取白色念珠菌50~100cfu，注入无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，平行制备2 个平皿，混匀，凝固，置23~28℃培养72 小时，计数。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。