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PCR的假阳性和假阴性如何解释

2021.11.16
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zhaoqisun

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假阳性

假阳性是指出现的 PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。产生的原因有:①引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行 PCR 扩增时,扩增出的 PCR 产物为非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或扩增产物的交叉污染。解决方法有:操作轻柔,防止靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外造成污染;除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材高压消毒;离心管及加样枪头等一次性使用。必要时,可在加标本前,将反应管和试剂用紫外光照射,以破坏存在的核酸。

假阴性

假阴性是指不出现特异扩增带,可能原因:引物设计不合理,酶失活或酶量不足,模板量太少,退火温度不合适,循环次数过少,产物未及时电泳检测等。解决方法有:重新设计引物,增加酶量或调换酶,增加模板量,调整退火温度,增加循环次数,及时检测扩增产物,一般在 48h 以内进行。


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