免疫磁珠分离法的原理和操作办法

　　一、免疫磁珠分离法（immunomagnetic separation，IMS）

　　1、原理

　　用包被在磁珠上的抗 E.coli O157：H7 特异性抗体捕获样品增菌液中的目标菌，然后在磁场作用下将磁珠从增菌液中沉淀，以磷酸缓冲液反复清洗，从而使 E.coli O157：H7 ，与样品中的其他成分及细菌分离，并将分离出的 E.coli O157：H7 菌体定量于一定体积，在具体应用中，还可加入适量的碱性鱼精蛋白（0.005mg/mL）以降低非靶菌体在玻璃试管壁的残留。

　　2、仪器设备及试剂

　　包被有抗 E.coli O157：H7 特异性抗体的免疫磁珠，免疫磁珠分离架，培养箱，均质器，mEC肉汤，山梨醇麦康凯培养基等。

　　3、操作方法

　　①增菌培养

　　在225mL mEC肉汤内加入25g 样品，36℃±1℃培养18～24h。

　　②磁珠分离

　　将一定量的磁珠（根据产品的说明决定）加入增菌肉汤中，充分搅拌混匀，让目标菌充分结合在磁珠上。将培养瓶放在分离架上，使磁珠吸附在培养瓶中靠分离架磁板的一面，倒掉培养液，将磁珠洗下。

　　③培养

　　将洗下的磁珠倒入山梨醇麦康凯平板中，让磁珠在培养基的表面滚动，使磁珠上吸附的 E.coli O157：H7 ，释放在培养基表面。再将平板放入培养箱内培养24h，取出观察菌落特征再进一步确认。