放线菌属于原核生物系统进化树上的(G+C)摩尔百分含量(mol%)高的革兰氏阳性菌分枝类群,它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性,但在其不同类群中,细胞壁的化学组分变化很大。
在做大肠杆菌超声时,采用的是400W,破碎5s停5s的方法,效果不错,但是用在链霉菌上,由于细胞壁组成差异一般没什么效果。链霉菌(放线菌)超声破碎前处理一般是配置成一定浓度的菌悬液。
使用超声波细胞粉碎机破碎时采用的具体条件是:取细菌的24h培养液于5000r/min下离心5min收集菌体;用pH7.5的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液洗涤3次,再用该缓冲液将菌体配成1:3的菌悬液。置于40mL大塑料试管内;将大塑料试管置于冰浴中,采用超声波细胞粉碎机破碎(功率200W,1/2”探头,破碎30s,间歇30s);破碎液于12000r/min下高速冷冻离心30min,收集细胞碎片和上清夜。
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