免疫荧光技术的标本的制作过程

免疫荧光技术在实际应用上主要有直接法和间接法。直接法是在检测样品上直接滴加已知特异性荧光标记的抗血清,经洗涤后在荧光显微镜下观察结果。免疫荧光直接法可清楚地观察抗原并用于定位标记观察。间接法是在检测样品上滴加已知的细菌特异性抗体,待作用后经洗涤,再加入荧光标记的第二抗体。如研制成的抗沙门氏菌荧光抗体,用于750例食品样品的检测,结果表明与常规培养法的符合率基本一致。

在食品卫生检疫中,荧光标记抗体检测标本的制作应力求保持抗原的完整性,并在洗涤和固定过程中不发生溶解或变性。此外,为了便于抗原和抗体接触形成抗原-抗体复合物,以及有利于观察和记录,要求制作的标本尽量薄,对标本中干扰抗原-抗体反应的物质应充分洗涤除去,以免影响标本的观察以及结果的判定。

荧光标记抗体检测标本的制作方法为:

①涂片:先将载玻片通过火焰3次,冷却后,挑取被检材料涂布成直径约1cm的圆形涂片,如材料太浓,也可将生理盐水加入被检材料中,混匀后均匀涂片。涂好后,晾干或以电风扇吹干备用;

②固定:不同的抗原采用不同的固定剂,一般常用的固定剂为95%～100%乙醇和丙酮,固定的条件温度为37℃、时间为3～15min,某些病毒最好以丙酮在-40～20℃下,固定30min,固定后应随即用PBS反复冲洗,干后即可用于染色。固定的目的是防止标本从玻片上脱落,以及去除组织中妨碍抗原抗体结合的类脂质。