常规 PCR 是扩增两引物之间的 DNA 片段,反向 PCR(reverse PCR)是用引物来扩增两引物以外的 DNA 片段。
一般先用限制性内切酶酶解 DNA(目的基因中不存在该酶的酶切位点,且片段应短于2～3kb),然后用连接酶使带有黏性末端的靶片段自身环化,最后用一对反向引物进行 PCR,得到的线性 DNA 将含有两引物外侧的未知序列。该技术可对未知序列扩增后进行分析,如探索邻接已知 DNA 片段的序列。
反向 PCR 已成功地用于仅知部分序列的全长 cDNA 克隆,Picter 中曾用此法扩增基因文库的插入 DNA。
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