用于其它遗传病的检测
Pici等人对囊性纤维化( cystic fibrosis,CF)基因突变进行了筛选研究,用4对外显子引物进行多重PCR扩增,然后用限制性内切酶消化PCR产物,再进行垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳,检查15例发现有3例发生了基因突变。Pior等设计了8对引物同时检测DMD/BMD和CF,通过凝胶电泳筛选 DMD/ BMD缺失突变,并用等位基因特异的寡核苷酸杂交确定CF突变是否存在。实验表明,可以通过多重PCR的方法从血斑中获得足够的DNA进行分子分析,可用于新生儿的筛选。 Pillers等人m用多重PCR和 Southern杂交方法研究了一位同时患AIED(Aland island eye disease)、甘油激酶缺乏(GKD)和DMD的病例,发现在DXS67(1 deoxy-D-xylulose5 -phosphate synthase67)和DMD基因之间出现基因缺失。另外,还有用多重PCR方法筛查类固醇硫酯酶( steroid sulfatase,,srs)缺乏症和诊断β地中海贫血患者的报道。
脊髓性肌萎缩症( spinal muscular atrophy,SMA)是一种常染色体隐性遗传神经性肌肉疾病。SMA会造成位于脑底和脊髓的下级运动神经元分裂,从而使其无法发出肌肉进行正常活动所依赖的化学及电信号。SMA主要影响患者的近端肌,即最靠近人体躯干部的肌肉。控制胃、肠和膀胱等器官运动的非随意肌不会受到影响。各型都会对控制随意肌运动的叫作运动神经元的神经细胞产生影响。最近的基因研究发现,运动神经元的死亡也许是因为缺少一种或几种蛋白,或者是它们不能完全发挥其功能而导致的。 Simard等应用多重实时反转录PCR方法(muli Xplex real-time reverse transcriptase -PCR)对存活运动神经元( survival motor neuron,SMN)的转录本进行定量,共检测了42个潜伏期SMA病人的血标本,每个病人取三个时间点,发现SMN的表达在每个病人的不同时间点上的转录是稳定的, SMN mRNA表达的实时定量检测可以作为SMA临床试验的生物标志以作为SMA临床试验的生物标志
甘露糖结合素( mannose-binding lectin,MBu)是一种血清蛋白,能够触发补体激活,因此在先天性免疫中发挥重要作用。低水平的MBL会损伤病原微生物的调理作用,进而导致儿童的反复感染、免疫受损病人的严重感染以及自身免疫疾病。MHBL的编码基因位于人类10q11.2~q21染色体,包括四个外显子,血清中MBL水平受其启动子多态性和MB2基因第一个外显子突变的影响。目前应用的MBL基因分型方法主要有以下几种:PCR限制酶切分析、序列特异寡核苷酸探针杂交( sequence-specific oligonucleotide probes,SsOP)、放大受阻突变体系( amplification refractory mutation system,ARMs)、ARMS联合SSOP、异源双链分析( heteroduplex analysis)、实时PCR以及应用小沟结合DNA探针的5端核酸酶分析。 Helena0等建立了种快速、高效的多重PCR方法对MBL2基因进行分型,并且将捷克人作为斯拉夫人的代表样本,应用此方法研究了MBI2的等位基因频率。共分析了359个不相关捷克人的MBL2基因,最终得出LYD单元型在斯拉夫人的祖先中比其它高加索人更常见,同时也证明了多重PCR是一种比传统PCR方法更快速、简便、省时省力的MBI2分型方法。
根据当前不育领域的研究,大约10%~15%的夫妇存在不育的问题,而在所有的不育个体中,男性不育大约占50%,其中40%~50%存在精子缺陷,如少精症和无精症。人类Y染色体的长臂对于精子的产生是必需的。在三个不同区域的缺失会导致严重的精子缺陷,包括非闭塞的无精子症和精子减少症。这些区域被称为无精子症因子( azoospermia factor,AZF),三个分离的非重叠区被定义为AzFa、AZFb、AZFc,与产生人类损伤的精子有关。近来的研究证明Yq染色体的微缺失会遗传给其儿子。Yeom等应用多重PCR扩增6个位点,包括Y染色体的性别决定区( sex-determining region on the Y chromosome,SRY)作为阳性对照,无精子症因子区域的5个序列标签位点( sequence-tagged site,Srs),其中模板是从不育男性血液中提取的基因组DNA。本研究中的引物为Cy3标记,PCR产物可以与固定的探针杂交,提供了一种敏感、高通量检测Y染色体缺失的方法,也是一种男性不育筛选的新方法。
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