着床前胚胎遗传学诊断( preimplantation genetic diagnosis,PGD)

　　PGD产生于10多年前,主要目的是识别基因突变或染色体错误引起的遗传性疾病。临床上最早是用来检测夫妻X隐形连锁疾病,随后应用于不同的患者来达到优生优育的目的,主要包括:单基因病携带者,无论显性或隐性、常染色体或X连锁；染色体结构异常携带者,包括易位、翻转、缺失、插入等；避免高龄产妇后代染色体异常；辅助生殖治疗反复植入失败的夫妇反复出现不明原因流产的夫妇。当前PGD已经成为产前诊断( prenatal diagnosis)的一种替代方法。

　　对于单基因缺陷患者,可以用多重PCR同时扩增多个位点,选择那些位于相同染色体或者临近致病基因的多态性标志位点进行扩增能够有效诊断突变位点和多态性等位基因,可以同时分析多个诊断位点,并且减少错误诊断的概率。另外,还可以扩增高变的指纹位点,指示DNA模板是否被污染

　　囊性纤维化病( cystic fibrosis,CF)是一种首次成功应用单细胞植入前基因诊断的单基因缺陷性疾病。CF的突变谱差别很大,因此,发展一种突变特异的PGD方法是行不通的。文献[35]建立了一种针对CF通用的多重PCR方法,用于胚胎的遗传学诊断。本研究应用了CF跨膜调控子( cystic fibrosis transmembrane regulator,CFTR)两侧的4个紧密连锁高多态性重复标识:D7S523、D7S486、DS480和D7S90。共检测了100个白细胞和50个卵裂球,其中99%6获得了多重PCR结果,总体等位基因遗失( allelic drop out,ADO)频率从2%~5%不等。确认ADO以及额外等位基因存在后,95%的多重PCR结果可以用来建立基因型标记。基于父母的基因型,考虑到由于变异参数(5%、ADO(0~2%)和单重组(1.1%~3%)造成的胚胎传送丢失,大约90%的胚胎能够应用单个卵裂球进行可靠的PGD基因分型。错误诊断的概率与已知的两侧标识双重组概率相当,小于0.05%。

因此,这种多态性和多等位基因标识系统是一种可靠的、可替代直接突变胚胎遗传学诊断的方法。