基因芯片的制备
以玻璃片或硅片为载体,采用原位合成和微矩阵的方法将寡核苷酸片段或cDNA作为探针按顺序排列在载体上。
荧光标记
在基因组DNA扩增过程中,将带有Cy3或Cy5荧光素的dUTP或dCTP加入到新合成的DNA链,使新合成的DNA链带有荧光标识。
杂交和洗涤
使带有荧光标记gDNA/cDNA与基因芯片上的探针进行特异性互补结合的过程称为杂交。
基因芯片扫描(microarray scanning)将杂交后的基因芯片置于芯片扫描仪内获得不同探针杂交信号强度的全貌图。
基因芯片数据分析
釆用图像分析软件对芯片图像进行分析,将图像信号转化为数字信号,对芯片上的数据釆用局部加权回归散点平滑法(locally weighted scatter plot smoothing,LOWESS或LOESS)进行归一化,根据Cy3或Cy5信号强度和比值判断差异基因。
采用实时荧光定量PCR对差异表达基因定量,验证差异表达基因。
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