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1.制琼脂板 以pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液配成1%~1.5%琼脂凝胶板,厚度2mm~3mm.
2.打孔 琼脂冷却后,按图打孔,打成对的小孔数列,孔径0.3cm~0.6cm,孔距0.4cm~1.0cm.挑去孔内琼脂,封底。
3.加样 一对孔中,一孔加已知(或待测)抗原,另一孔加待测(或已知)抗体。
4.电泳 将抗原孔置于负极端。电压2.5V/cm~6V/cm,或电流强度3mA/cm~5mA/cm,电泳时间30min~90min.