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生物样品的前处理技术--RNA的提取

2021.12.21
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zhaoqisun

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用0.14mol/L氯化钠溶液将组织作匀浆并反复提取细胞质中的核蛋白,而留下含有DNA的细胞核物质,然后用10%乙酸调至pH4.2沉淀,离心弃去上清液,先用0.5mol/L氯化钠溶液沉淀后用水洗涤沉淀,得核糖核蛋白后溶解于0.5mol/L碳酸氢钠溶液中,离心,取上清液,调至pH4.2沉淀,以0.5mol/L氯化钠溶液再一次除脱氧核糖核蛋白。核糖核蛋白中的蛋白质可用含少量辛醇的氯仿抽提除去,核酸留在碳酸氢钠溶液中,加入乙醇,RNA以钠盐形式沉淀出来。

破碎细胞做成匀浆时,加入去污剂十二烷基磺酸钠或二甲苯磺酸钠,加入含水苯酚,与匀浆一起振荡,DNA与蛋白质沉淀于苯酚层,水层中含有RNA和多糖,然后用乙醇使RNA沉淀。苯酚法是目前提取不降解的RNA最有效的方法。


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