药物检测案例--维生素类药物及其制剂的质量检测

2021.12.22

zhaoqisun

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一、性状

维生素B₁、维生素C、维生素A和维生素E的性状描述见表1。

二、鉴别

(一)化学法

1.硫色素反应维生素B₁在碱性溶液中,可被铁氰化钾氧化生成硫色素,硫色素在正醇或异丁醇中显蓝色荧光。方法为:取本品约5mg,加氢氧化钠试液2.5ml溶解后加铁化钾试液0.5ml与正醇5ml强力振摇2分钟,置使分层,上面的醇层显强的蓝色荧光加酸使成酸性、荧光即消失再加碱使成碱性,荧光又显出。

用此法别维生素B₁片时,需水溶解,过滤,取滤液鉴别;注射液的鉴别方法与原料药相同。

2.沉淀反应维生素B₁结构中的两个杂环可与生物碱沉淀剂反应:与碘化永钾生成淡黄色沉淀;与碘试液生成红色沉淀;与硅钨酸生成白色沉淀;与苦酮酸生成扇形白沉淀。

3.与硝酸反应维生素B₁与NaOH,分解产生Na₂S,可与硝酸铅反应生成黑色沉淀。

4.氧化反应

(1)与硝酸银反应:维生素C中的烯二醇基性具有强还原性,与硝酸银反应生成黑色

金属银沉淀。

(2)与2.6-二氯靛酚反应:维生素C的烯二醇基具有强还原性,酸性条件下与玫瑰红色的2.6-二氯靛酚反应,使其变成无色的酚亚胺。

方法为:取本品0.2g,加水10ml溶解后,分成二等份,在一份中加硝酸银试液0.5ml,即生成银的黑色沉淀。在另一份中加二氯靛酚钠试液1-2滴,该试液的颜色即消失。

用此法鉴别维生素C片剂、泡腾颗粒时,需加水溶解,过滤,取滤液鉴别;泡腾片用无水乙醇溶解,过滤,取滤液鉴别;注射液的鉴别方法与原料药相同。

(3)与其他氧化剂反应:维生素C还可与其他氧化剂反应(如亚甲蓝、高锰酸钾、碱性酒石酸铜和磷钼酸等)生成去氢抗坏血酸,使氧化剂的颜色消失,或使溶液产生沉淀或呈现其他颜色。维生素E与硝酸反应,使溶液显橙红色,这是因为维生素E在酸性条件下水解生成生育酚,生育酚同时被硝酸氧化为邻醌化合物生育红而显橙红色。

5.糖类反应维生素C可在三氯醋酸或盐酸存在下水解、脱羧、生成戊糖、再转化为糠醛,加入吡咯,加热至50℃,显蓝色。

6.三氯化锑反应维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中即显蓝色,渐变成紫红色。其机制为维生素A和氯化锑(Ⅲ)中存在的亲电试剂氯化高锑(V)作用形成不稳定的蓝色碳正离子。

方法为:取维生素A油溶液1滴,加三氯甲烷10ml振摇使溶解,取2滴,加三氯甲烷2ml与25%三氯化锑的三氯甲烷溶液0.5ml,即显蓝色,渐变成紫色。

(二)光谱法

1.紫外-可见分光光度法维生素C在0.01mol/L酸溶液中,于243nm波长处有最大吸收。

2.红外分光光度法原料药维生素C可采用红外分光光度法进行鉴别,要求供试品的红外光吸收图谱应与对照图谱一致。

三、检查

维生素C中存在微量的铜、铁离子时,可加速其氧化变色。《中国药典》2010年版二部规定原子吸收分光光度法检查维生素C中铁和铜的限量。

维生素C中铁的检查方法:取本品5.0g两份、分别置25ml量瓶中,一份中加0.Imol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液(B),另一份中加标准铁溶液(精密称取硫酸铁863mg,置1000ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,精密量取10ml,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀)1.0ml,加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液(A)。照原子吸收分光光度法,在248.3nm的波长处分别测定,应符合规定。

维生素C中铜的检查方法:取本品2.0g两份,分别置25ml量瓶中,一份中加 0. 1mol/L硝酸溶液溶解而刻度,摇匀,作为供试品溶液(B);另一份中加标准铜液(精密称取硫酸制393mg,置1000ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,据匀,精密量取10ml,置1000ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀)1.0ml,加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对管液(A)。照原子吸收分光光度法,在324.8nm的波长处分别测定,应符合规定。

四、含量测定

维生素B₁及其制剂常用的含量测定方法有硅钨酸重量法、硫色素荧光法、银量法、酸性染料比色法、非水溶液滴定法及紫外一可见分光光度法等;维生素C及其制剂常用氧化还原法测定其含量。

(一)容量法

1.非水溶液滴定法维生素B₁有两个碱性基团,可与高氯酸以1:2的比例反应。根据消耗高氯酸的量可计算维生素B₁的含量。测定时需加入醋酸汞消除盐酸的干扰。

维生素B1的含量测定方法:取本品约0.12g,精密称定,加冰醋酸20ml,微热溶解后,放冷,加醋酐30ml,照电位滴定法,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定,并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于16.86mg的C₁₂H₁₇CIN₄OS·HCl。按干燥品计算,含C₁₂H₁₇CIN₄OS·HCl不得少于99.0%。

2.碘量法维生素C结构中的二烯醇基具有还原性,可用氧化还原法测定其含量,如碘量法和2,6-二氯靛酚法等。《中国药典》二部规定用碘量法测定维生素C及其制剂的含量。

维生素C的含量测定方法:取本品约0.2g,精密称定,加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解,加淀粉指示液1ml,立即用碘滴定液(0.05mol/L)滴定,至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪色。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)当于8.806mg的CH06本品含C₆H₈O₆不得少于99.0%。

维生素C片的含量测定方法:取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于维生素C0.2g),置100ml量瓶中,加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml的混合液适量,振摇使维生素C溶解并稀释至刻度,摇匀,迅速滤过,精密量取续滤液50ml,加淀粉指示液1ml,立即用碘滴定液(0.05mol/L)滴定,至溶液显蓝色并持续30秒不褪色。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C₆H₈O₆。本品含维生素C(C₆H₈O₆)应为标示量的93.0%～97.0%。

维生素C注射液的含量测定方法:精密量取本品适量(约相当于维生素C0.2g)加水15ml与丙酮2ml,摇匀,放置5分钟,加稀醋酸ml与淀粉指示液1ml,用碘滴定液0.05mol/L)滴定,至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪色。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C₆H₈O₆。本品含维生素C(C₆H₈O₆)应为标示量的93.0%~97.0%。

(二)紫外-可见分光光度法

维生素B₁分子中有共轭双键,在紫外-可见区有吸收。pH=2时,维生素B1在246nm处有最大吸收,吸收系数为421。《中国药典》2010年版采用紫外-可见分光光度法测定维生素B1片及注射液的含量。维生素A分子中有共多烯侧链,在325～328nm的波长范围内有最大吸收。

1.维生素B₁片的含量测定方法取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于维生素B₁25mg),置100ml量瓶中加盐酸溶液(9→1000)约70ml,振摇15分钟使维生素B₁溶解,用上述溶剂稀释至刻度,摇匀,用干燥滤纸滤过,精密量取续滤液5ml,置另一100ml量瓶中,再加上述溶剂稀释至刻度,摇匀,照紫外-可见分光光度法,在246nm的波长处测定吸光度,按C₁₂H₁₇ClN₄OS·HCl的吸收系数为421计算,即得。本品含维生素B₁(C₁₂H₁₇ClN₄OS·HCl)应为标示量的90.0%-110.0%。

2.维生素B注射液的含量测定方法精密量取本品适量(约相当维生素B₁50mg)置200m量瓶中,加水稀释至刻度,匀,精密量取5ml,100ml量瓶中,加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度,照分光光度法,在246nm的波长处测定吸度,按C₁₂H₁₇ClN₄OS·HCl的吸收系数为421计算,即得。本品含维生素B₁(C₁₂H₁₇ClN₄OS·HCl)应为标示量的93.0%~107.0%。

3.维生素A的含量测定方法(第一法)取供试品适量,精密称定,加环已烷溶解定量稀释制成每1m中含9-15U的溶液,照紫外一见分光光度法,测定其收的波长,并在表中所列各波长处测定吸光度,计算各光度与波长328nm处吸光度的比值和波长328处的值。本品含维生素A应为标示量的70%～103.0%。