热盐水试验的检查过程

　　(1) 样本处理

　　① 组织匀浆：称取100-200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL预冷的Lysis Buffer，再加入50ul Reagent A ， 0℃冰浴中上下研磨组织20次；有未研磨开的组织，可用双层纱布过滤。

　　② 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 × g 5-10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5 × 107个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，再加入50ul Reagent A，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨细胞20-30次。

　　(2) 将组织或细胞匀浆物转移到1.5ml离心管中，4℃，700× g 离心5 min。细胞核沉淀在收集管底部，弃上清。加入0.5 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬沉淀；

　　(3) 取另一新离心管内加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重悬液，沿管壁小心地加入到此离心管中,置于Medium Buffer之上，4℃， 700 × g 离心5min。将上清转移到新离心管，细胞核沉淀在管底；

　　(4) 弃上清，在细胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重悬细胞核沉，1000 × g 离心10min ，弃上清，得较纯的细胞核沉淀；

　　(5) 用50-100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。