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PCR(聚合酶链式反应)的反应原理

2021.12.28
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zhaoqisun

致力于为分析测试行业奉献终身

  【原理】

  PCR(polymerase chain reaction)用于在体外将微量的目标DNA大量扩增,以便进行分析。

反应体系:

①样品DNA;

②引物(primer),是人工合成的一对寡核苷酸链(约15-20个核苷酸),用于扩增夹在双引物与模板DNA互补区之间的区域;

③4种dNTP;

④Tag DNA聚合酶,是从一种嗜热水生菌(Thermus aquaticus)中分离出来的。此酶最适作用温度为75~80℃,但短时间在95℃下不失活。

⑤适宜的缓冲体系和适量的Mg2+。

反应过程:

①变性:将反应液置于PCR仪中,提高温度(约90-95℃)使DNA双链解离;

②复性:降温(约60℃左右)退火,使引物与模板结合;

③延伸:升温度至70-75℃,在引物的引导下合成模板单链的互补链,从而形成DNA双链片段;

④重复上述“变性——复性——延伸”的过程。最初几次循环中形成的长链DNA较多,但随着反应的进行,长链DNA以算术级数增加,而夹在两个引物之间的目标DNA以指数级数增长,经大约20—30次循环后,扩增产物中主要是目标DNA。


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