【原理】
PCR(polymerase chain reaction)用于在体外将微量的目标DNA大量扩增,以便进行分析。
反应体系:
①样品DNA;
②引物(primer),是人工合成的一对寡核苷酸链(约15-20个核苷酸),用于扩增夹在双引物与模板DNA互补区之间的区域;
③4种dNTP;
④Tag DNA聚合酶,是从一种嗜热水生菌(Thermus aquaticus)中分离出来的。此酶最适作用温度为75~80℃,但短时间在95℃下不失活。
⑤适宜的缓冲体系和适量的Mg2+。
反应过程:
①变性:将反应液置于PCR仪中,提高温度(约90-95℃)使DNA双链解离;
②复性:降温(约60℃左右)退火,使引物与模板结合;
③延伸:升温度至70-75℃,在引物的引导下合成模板单链的互补链,从而形成DNA双链片段;
④重复上述“变性——复性——延伸”的过程。最初几次循环中形成的长链DNA较多,但随着反应的进行,长链DNA以算术级数增加,而夹在两个引物之间的目标DNA以指数级数增长,经大约20—30次循环后,扩增产物中主要是目标DNA。