微量凯氏定氮法
1)原理
同常量凯氏定氮法。
2)主要仪器
①凯氏烧瓶(100mL)。
②微量凯氏定氮蒸馏装置
3)试剂
①0.0100mol/L盐酸标准溶液。
②20g/L硼酸吸收液:称取20g硼酸溶解于1000mL热水中,摇匀备用。
③其他试剂同常量凯氏定氮法。
4)操作方法
(1)样品消化 精密称取均匀固体样品0.2～2.0g,或半固体样品2～5g或吸取液体样品10～20mL,小心移入100mL干燥的凯氏烧瓶中。向瓶内加入0.2g硫酸铜、3g硫酸钾及一定量的浓硫酸(每克样品加硫酸15mL)将凯氏烧瓶45°倾斜置于电炉上。同常量法消化至消化液呈透明蓝绿色溶液时,再继续加热0.5h,完成消化。待消化液冷至室温后,用蒸馏水干净地转入100mL容量瓶中,并用蒸馏水定容,摇匀,备用。
(2)蒸馏与吸收 连接好微量定氮装置,于水蒸气发生瓶内装水至2/3容积处,加甲基橙指示剂数滴及硫酸数毫升,以保持水呈酸性,加入数粒玻璃珠,加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。检查装置的气密性。
在接收瓶内加入25mL20g/L硼酸及2滴混合指示剂,将冷凝管下端插入液面以下。准确量取消化稀释液10mL,经漏斗加入反应管内,用少量蒸馏水冲洗漏斗。经漏斗再加入10mL400g/L氢氧化钠溶液,使呈强碱性,立即夹好漏斗夹,并加少量水于进样漏斗中封口,以防漏气。夹紧废液排出口的螺旋夹,进行水蒸气蒸馏。蒸馏至冷凝管下端的吸收液变为绿色开始计时,继续蒸馏3min后,将冷凝管尖端提离液面再蒸馏1min,用蒸馏水冲洗冷凝管尖端后停止蒸馏。蒸馏结束时,夹紧簧夹,断绝蒸汽,使蒸馏瓶内的溶液吸入回流管中。松开弹簧夹,从漏斗加入蒸馏水40～50mL,再通蒸汽加热回流,将蒸馏瓶洗涤一次备用。
(3)滴定 吸收液用0.0100mol/L盐酸标准溶液滴定至微红色为终点。
(4)空白试验 不加试样,按上述操作作空白试验。
5)计算
式中 w——蛋白质的质量分数,%;
V0——滴定空白蒸馏液消耗盐酸标准液体积,mL;
V1——滴定样品蒸馏液消耗盐酸标准液体积,mL;
c——盐酸标准液的浓度,mol/L;
0.014——氮的摩尔质量,g/mol;
F——蛋白质系数;
m——样品质量,g;
V2——蒸馏所加样品消化液的量,mL。
6)说明
①蒸馏前给水蒸气发生器内装水至2/3体积处,加甲基橙指示剂数滴及硫酸数毫升,以使其始终保持酸性,这样可以避免水中的氨被蒸出而影响测定结果,同时可以指示因水蒸气气压不足而使氨气发生倒吸溶于水中,使得测定结果偏低。
②在蒸馏时,蒸汽发生要均匀充足,蒸馏过程中不得停火断汽,否则将发生倒吸。
③加碱要足量,操作要迅速;漏斗应采用水封措施,以免氨由此逸出损失。
首页
