蛋白水解酶法
（包括菠萝酶、木瓜酶、无花果酶、胰蛋白酶等） 以菠萝酶介质法为例：
⑴取菠萝酶1g，加pH5.5磷酸盐缓冲液100ml，充分振摇混匀，置37℃水浴箱30min，离心沉淀后取上清液即1%菠萝酶液。放置4℃冰箱贮存。
⑵待检者红细胞及对照红细胞用生理盐水洗涤1次（有溶血的红细胞除外），配成5%红细胞悬液。
⑶取小试管15支，分3排，每排试管按C、c、D、E、e顺序标记。
⑷每排第1管加抗C血清，第2管加抗c血清，第3管加抗D血清，第4管加抗E血清，第5管加抗e血清各1滴。
⑸第1排各管加待检者红细胞悬液各1滴，第2排加阳性对照红细胞，第3排加阴性对照红细胞。
⑹每排各管加1%菠萝酶液1滴。
⑺混匀，置入37℃水浴箱中1h观察结果，若无凝集，应查找原因。
结果判读：?
⑴倾斜试管肉眼观察，先看阳性对照管应凝集，阴性对照管不凝集，再看待检者的试管有凝集者为阳性，无凝集者为阴性。如肉眼观察有疑问者再做镜检。
⑵分别记录，阳性或阴性。
⑶抗RhD阴性者，应作间接抗人球蛋白试验，以免遗漏Du型。附注：凡检查出体内有Rh抗体者，应发给Rh血型卡。需要时，一方面动员捐出血液，另—方面须提高警惕，以免接受不相合的血液而发生意外。
盐水介质法
⑴试管法①取小试管3支，1支注明抗D，另1支注明阳性对照，最后1支注明阴性对照；②将室温盐水反应活性的抗D血清各1滴加入上述试管内；③抗D试管中加入1滴5%待检者红细胞（盐水、血清）悬液，阳性对照及阴性对照试管中分别加入相应的阳性红细胞及阴性红细胞悬液1滴；④轻轻混匀，于3000r/min离心15s；⑤取出轻轻摆动观察有无凝集。
结果判读：抗D试管中出现凝集，而阴性对照试管不凝集，阳性对照试管凝集，待检者为阳性；抗D管和阴性对照管均不凝集，阳性对照试管凝集，待检者为阴性。
⑵平板法①取洁净平板1块，用记号笔划出反应小格，在左侧注明抗D，中间段注明阴性对照，右侧注明阳性对照；②将室温盐水反应的抗D血清各1滴加入上述小格内；③抗D小格内加入待检者5%红细胞悬液1滴，阳性对照小格内加入阳性对照红细胞悬液1滴，阴性对照小格加入阴性对照红细胞悬液1滴；④用干净玻棒搅拌红细胞悬液和试剂血清充分混合；⑤连续轻轻倾斜转动平板，一般在2min内观察结果，或按试剂说明书规定的时间观察结果。
结果判读：同试管法。
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