1) 肿瘤细胞培养物制成悬液,并稀释至需要的细胞浓度.
2) 于微量试验班的小孔内分别接种0.2ml肿瘤细胞(内含5×102)个细胞,37℃培育24h.
3) 细胞贴壁后,轻轻轻去培养基,加1mlPBS洗涤,轻去洗涤液及未贴壁细胞.
4) 向小孔分别加入0.2ml不同浓度的淋巴细胞(分别含有5×105个细胞,5×104个细胞,5×103个细胞),使淋巴细胞与癌细胞之比依次为1000:1、100:1、10:1.
5) 45min后加0.1ml5%胎牛血清,37℃继续培养2-3天.
6) 2%台盼蓝染色,翻转微量试验班,计数活存的肿瘤细胞,并设正常人淋巴细胞代替肿瘤患者淋巴细胞作对照,每份需同时做3个复孔,分别检查各孔中存活活细胞数,按下列公式计算细胞毒率,并做t检验.