目的蛋白因其物种来源和组织特异性的不同,在种类和性质上有很大差异,因此并没有一种制备方法可以适用于所有蛋白的提取。这就需要我们进行全面的分析后才能选择**合适的蛋白制备方法,在这个过程中遵循的一个基本原则是「知己知彼」。
首先,「知己」是要了解:样品是来自什么物种?目的蛋白定位在哪种组织或细胞器?是可溶蛋白还是不可溶蛋白?是高丰度蛋白还是低丰度蛋白?在制备时需要保持蛋白的天然活性,还是需要变性蛋白。
其次,「知彼」是要知道:哪种方法或试剂能够防止蛋白降解、聚集、沉淀、变性、修饰?哪种能够去除高丰度蛋白干扰,富集低丰度蛋白?哪种能去除核酸、多糖、脂肪等杂质?哪种能在有限的实验条件下,简便快速地获得高纯度且完整性好的蛋白。
遵循「知己知彼」的原则对蛋白样品制备进行全面分析,就能明确蛋白样品制备的合适方法或试剂。
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