做一个模拟胃内容物中药物反应试验,需要动态测定某药品含量变化。分析时碰到一个棘手问题,进样量同样用 20ul,用对照品进样时色谱峰形不错,进样品时却一直不能得到好的峰形。后来分析是模拟胃内容物样品的酸度过高的因素,可我通过稀释的方法让样品酸度和流动相接近,虽然峰形没问题了,却发现因稀释导致分析物在样品中含量下降,低于最低检测限了,如何是好呢?
答:稀释很方便,但灵敏度更高的检测器不容易找,不过还是有个简单的解决方案。
当用流动相稀释样品时,只要稀释后样品中有机相含量比流动相中的有机相比例低 10 个百分点以上(如流动相中甲醇含量是 40%,则样品中甲醇含量一定要低于 30%),样品流动会被色谱柱进口端延缓或阻挡,称为 “柱上富集”。由于“柱上富集” 作用的存在,这种情况下进行大体积样品进样,可避免样品溶剂组成和流动相一样时进样量过大产生的“峰展宽”。针对你提的这个实例,可用稀的 NaOH 溶液调节样品 pH 和流动相匹配,并将样品最终稀释一倍。将进样量提高一倍到 40ul,就可达到最低检测限的要求。
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