相同类型的键合相色谱柱,甚至同一品牌的色谱柱,在进行分析方法建立时对同一样品可能会得到不同的分离效果,其原因是固定相的制备重复性偏差,或采用的原料、生产工艺等不同。用由弱酸性高纯度(B型)硅胶制得的固定相分离碱性化合物,批次之间的变化不很大。不同厂家的同种类型色谱柱(如C18柱)很难能得到相同的分离效果。
键合相色谱柱不同引起的保留值与选择性变化的原因可概括为:硅胶基质的物理化学性质存在差异,如比表面积、平均孔径、纯度等;键合相存在差异,如交联型和非交联型、键合相密度、封尾剂及封尾的完全程度。
硅胶基质表面积的不同可引起保留值的变化。表面积增加,有机相的量与保留值提高。硅胶基质表面上硅羟基类型及浓度的差异也能引起保留值及分离选择性的不同。
非交联型键合固定相制得的色谱柱的批次之间的重现性好于交联型键合固定相,致密键合固定相比低硅烷浓度键合相的重现性好,也更稳定。封尾处理的固定相对不同性质样品的选择性与峰形会有差异。另外,硅烷化反应条件的不同也可能导致不同品牌键合相之间保留行为的差异。
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