混合淋巴细胞培养试验的注意事项及检查过程

　　注意事项

　　检查时：本试验可作为器官移植筛选供体的方法，转化率低者移植成功率高，转化率高者成功率低。

　　不适宜人群：排斥反应大的人

　　检查过程

　　（1）供体淋巴细胞的制备

　　新鲜外周静脉血按1∶1比例加在装有比重为1.077的淋巴细胞分离液的离心管中，轻稳加在液面上 2000 r/min离心20 min，吸取中间雾状淋巴细胞层，生理盐水洗涤2次，台盼蓝染色，计数板计数。调整细胞密度为2×10^9/L，分成3管，各自离心,留取沉淀。 每管中加入250 μL丝裂霉素(终浓度50 mg/L)和1.75 mL生理盐水，37℃水浴40 min， 生理盐水离心洗涤2次。用含100 mL/L胎牛血清的RPMI 1640液调整细胞密度为1×1010/L。加入抗体封闭抗原，标记为D。

　　（2）受体淋巴细胞的制备

　　新鲜外周静脉血按1∶1比例加在装有比重为1.077的淋巴细胞分离液的离心管中，轻稳加在液面上， 2000 r/min离心20 min，吸取中间雾状淋巴细胞层， 生理盐水洗涤2次， 用含120 mL/L胎牛血清的RPMI 1640培养液调整细胞密度为1×1010/L， 标记为R。

　　（3）混合淋巴细胞培养

　　将已制备好的R和D按如下分组加入96孔板，置37℃，50 mL/L CO2孵箱中培养24 h。 A组：R 50 μL+D 50 μL；B组：R 50 μL+D 50 μL+IL?2纯化中和mAb 15 μL；C组：R 50 μL+IL?2纯化中和mAb 15 μL；D组：R 50 μL。 每组3个复孔，空白对照组为RPMI 1640培养液100 μL。