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荧光分光光度计是测样品发射出的荧光的,而紫外分光光度计测的是样品的吸收。荧光分光光度计用一束光(激发光)穿过样品的溶液,然后检测样品发射出来的荧光。荧光波长总是比激发波长更长。为了防止激发光对检测的干扰,检测器与光源是垂直的。紫外分光光度计将光源分成两束,一束通过样品溶液,另一束通过空白对比,然后比较这两束光的强弱,以便确定有多少光线被样品吸收了。