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一步法,使用特殊引物,全程只设置一个温度即可完成扩增.这种特殊引物有ZL.二步法即循环扩增中设置2个步骤,这个方法主要扩增短片段,一个是95度变性,另一个是退火与扩增的温度,一般设置在55~60之间,当然也有例外.三步法就是平常见到的方法,扩增循环有三步,变性,退火,延伸.