(1)受检血清必须新鲜，如放置室温2h以上，会使补体活性下降。
(2)补体的溶血活性受多种因素的影响，如绵羊红细胞浓度及致敏抗体的量等。当每一致敏红细胞吸附的抗体分子低于100时，红细胞溶解程度随细胞浓度的增加而减少。当用高浓度抗体致敏时，溶血程度随细胞的增加而增加。红细胞浓度增加一倍，可使50%溶血补体量增加25%左右。钙、镁离子的存在可稳定溶血系统。但含量过多时，反而抑制溶血反应。因此在进行试验时，需对反应的各个环节作严格控制。
(3)本试验不能测定补体蛋白的绝对值，也不能测定备解素系统中的成分。
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