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细胞冻存一般逐级降低温度，4度30min-1h，不要超过一个小时；－20度30min，不要超过30min，或者可以不需要，直接放到－70到－80度的冰箱，过夜，这一步是必须的，如果像你那样，估计细胞活力已经降低很多。不过还要看细胞类型，癌细胞应该还好一些，我的人表皮角质化细胞在－20度放了超过一个小时，过几天我特意拿出来检测，细胞又一半多已经失去活力了。
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