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关于密度梯度离心法的操作介绍

2022.3.09
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coco5517

认真做好每一件喜欢的事,把每一件要做的事都变成喜欢并认真去做的事

  纯化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度离心法,能得到比较纯的病毒。其过程如下:

  1、将收集的组织或脏器或其他,用玻璃匀浆器充分研磨后制成悬液,经反复冻融3 次后,置 -20 ℃冰箱中,备用。

  2、先以5000g离心15分钟后,获取上清夜,然后再20000g高速离心30分钟后取上清夜。

  3、接着10万g超速离心2h,将沉淀用少量STE溶解。

  4、先在超速离心管中加入5-8mL的第3步所获取的含病毒样品的溶解液,然后在离心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的时候是用长针头从底部往上加的。11万g离心2.5h,发现在30 %与45 % 以及45 % 与60 %之间都有一条明亮的带,用长针头将两条不同部位的带都吸取出来,分别收集到不同的瓶内。

  5、去蔗糖;用STE缓冲液适量稀释纯化的病毒,然后11万g离心3h,用少量STE(根据沉淀的量决定加入多少)缓冲液把沉淀悬起,即最后获得了纯化的病毒。-20度冻纯备用,用时可用分光光度计测定其病毒含量。

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