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分析溶液的方法-沉降速度法的简介

2022.3.09
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coco5517

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  沉降速度法是分析溶液中大分子的大小、形状、多组分成份行之有效的方法。它是在强离心力场作用下通过测量大分子层的移动速度来测量大分子的沉降系数(S),该系数可以表示为颗粒沉降速度与重力场的比率,也可以表示颗粒的浮力质量与它的摩擦系数之比,反映分子量(M)、分子大小与形状的关系。对于理想单组分、非相互作用体系,通过测量分界面单点移动速度的传统方法就可得到精确的S值。

  但对于复杂的相互作用系统,例如蛋白质寡聚作用、核酸杂交、蛋白核酸相互作用、受体配体与抗原抗体识别、分子组装、拆卸等体系,由于浓度梯度引起的扩散作用将掩蔽存在的多组分成份,通过单点或二阶巨分析得到的是整个系统的平均S值,而不是实际存在的S值分布。这些技术在应用上有一定趋限性。然而[1],近年来沉降速度法在数据分析方面取得了举世瞩目的进展,沉降速度数据与LAMM方程直接拟合揭示了移动分界面许多生物信息,该技术在我们了解活体内大分子的行为中起着举足轻重的作用。

  在十分强大的离心力场中使溶质沉降,对沉降状态进行观测。从沉降速度测定求得的高分子沉降系数,除分子量外还受分子形状等的影响,但沉降系数作为表示高分子的特征是非常重要的。此值与用其他方法求得的扩散系数相配合就可以算出分子量。另外,对沉降系数不同成分的混合物进行分析,也可用沉降速度法,同时,也是对提纯高分子样品纯度检验的重要方法之一。这些测定中虽很多是利用分析用的超速离心机,但用密度梯度离心法和使用分离用超速离心机也是可以的。

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