(1) 200ng双链DNA(1μl)和7.5ng随机引物(1μl)混合后置于eppendorf管内,水浴煮沸5分钟后，立即置于冰浴中1分钟。

　　(2) 与此同时,尽快在一置于冰浴中的0.5ml eppendorf管内混合下列化合物:

　　20mmol/L DTT 1μl

　　未标记的dNTP溶液 1μl

　　10×随机标记缓冲液 1μl

　　[α-32 P] dATP(比活性>3000Ci/mmol； 10μCi/μl) 3μl

　　ddH2O 1μl

　　(3) 将步骤(1)eppendorf管中的溶液移到步骤(2)管中。

　　(4) 加入5单位(约1μl) Klenow片段, 充分混合,在微型离心机中以12000g离心1-2秒, 使所有溶液沉于试管底部,在室温下保温3-16小时。

　　(5) 在反应液中加入10μl缓冲液A后,将放射性标记的探针保存在-20℃下备用。同时计算放射比活性。

　　[注意]

　　1、引物与模板的比例应仔细调整，当引物高于模板时，反应产物比较短，但产物的累积较多；反之，则可获得较长片段的探针。

　　2、模板DNA应是线性的，如为超螺旋DNA，则标记效率不足50%。