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免疫共沉淀实验注意的问题有哪些?

2022.3.19
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coco5517

认真做好每一件喜欢的事,把每一件要做的事都变成喜欢并认真去做的事

 注意的问题:

  (1)细胞裂解采用温和的裂解条件,不能破坏细胞内存在的所有蛋白质-蛋白质相互作用,多采用非离子变性剂(NP40或Triton X-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的,通过经验确定。不能用高浓度的变性剂(0.2%SDS),细胞裂解液中要加各种酶抑制剂,如商品化的cocktailer。

  (2)使用明确的抗体,可以将几种抗体共同使用。

  (3)使用对照抗体:

  单克隆抗体:正常小鼠的IgG或另一类单抗

  兔多克隆抗体:正常兔IgG


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