最适生长pH值为4-6。 耐酸生长在pH3.8的环境仍能生长。 该菌株不产气，在20℃下能生长。
从不同的标本中分离乳酸杆菌时，根据乳酸杆菌所在生境的不同以及是否为优势菌可选择不同组分的培养基。比较常用的培养基有MRS（ Man Rogosa Sharpe）培养基、RSMA（ Ruthenium Skim Milk Agar）培养基、番茄汁琼脂培养基（Tomato Juice Agar）等。常见乳酸杆菌在MRS培养基上的茵落形态：卷曲乳酸杆菌：中间饱满，周围弥散，不规则；詹氏乳酸杆菌：饱满，边缘规则；格氏乳酸杆菌：扁平，周围弥散，边缘规则。
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