亮氨酸拉链的转录因子的介绍

　　酵母转录因子GCN4是通过亮氨酸拉链（bZIP）结构结合DNA的蛋白质之一，当GCN4二聚体与DNA结合时，亮氨酸拉链区的2个单体结合为平行的卷曲螺旋结构，而其基区由无规线团结构变为α螺旋.为探讨亮氨酸拉链蛋白与DNA的结合机理，设计了含有GCN4亮氨酸拉链蛋白基区结合DNA的必需氨基酸的折叠片段，并将其克隆到Escherichia coli BL21，讨论了此亮氨酸拉链蛋白的表达条件.在蛋白质的小量表达试验中，重组子Escherichia coli BL21于5 mL含有50 μg/mL氨苄青霉素和34 μg/mL氯霉素的LB液体培养基中培养至对数期，加入不同浓度的IPTG，继续培养以诱导蛋白质的表达，在不同的时间（ 如：诱导前，诱导2,4,6,8 h) 取样100 μL到1.5 mL离心管中、离心收集沉淀，将沉淀悬浮于样品缓冲液中，用10% SDS-PAGE检测；在10 L含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中进行了大量表达，根据小量表达的试验结果确定了IPTG的浓度和诱导时间. 结果表明：含有这种拉链蛋白质的重组子Escherichia coli BL21在37℃下小量培养时，0.1～0.8 mmol的 IPTG均可在2～10 h内诱导该蛋白质表达； 而大量培养时，0.2 mmol和0.4 mmol的 IPTG在37℃均不可能诱导表达，只在28℃时才表达； 小量培养和大量培养的最佳诱导时间为4～6 h，诱导剂 IPTG的浓度为0.2 mmol，大量表达的温度为28℃而不是 37℃.