胃蛋白酶的测定—胃蛋白酶测定法

方法名称： 胃蛋白酶的测定—胃蛋白酶测定法

应用范围： 本方法采用胃蛋白酶测定法测定胃蛋白酶的效价。

本方法适用于胃蛋白酶。

方法原理： 精密称取本品适量，加盐酸溶液制成每1mL中约含0.2-0.4个单位的溶液，照胃蛋白酶测定法，测定胃蛋白酶的效价。

试剂： 1. 血红蛋白试液

2. 三氟醋酸溶液

3. 盐酸溶液

仪器设备： 可见分光光度计

试样制备： 1. 供试品溶液的制备

精密称取本品适量，加盐酸溶液稀释制成每1mL中约含0.2-0.4个单位的溶液，作为供试品溶液。

2. 对照品溶液的制备

精密称取酪氨酸对照品适量，加盐酸溶液稀释制成每1mL中约含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤： 1.供试品的测定

取大小相同的试管6支，其中3支精密加入对照品溶液1mL，另3支精密加入供试品溶液1mL，置37℃±0.5℃水浴中，保温5分钟，精密加入预热至37℃±0.5℃的血红蛋白试液5mL，摇匀，并准确计时，在37℃±0.5℃水浴中反应10分钟，立即精密加入5%三氟醋酸溶液5mL，摇匀，滤过，取续滤液备用。另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5mL，置37℃±0.5℃水浴中保温10分钟，再精密加入5%三氟醋酸溶液5mL，其中一支加供试品溶液1mL，另一支加上述盐酸溶液1mL，摇匀，滤过，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照紫外-可见分光光度法，在275nm的波长处测定吸光度，按下列公式计算，即得。