1、直接镜检 取溃疡处渗出液、脓液、穿刺液等标本作氢氧化钾 涂片，可见圆形、厚壁10～60μm直径的芽生孢子，芽孢可以单生或多生、典型者为多生，芽孢小者1～ 2μm直径，大者10μm或更大。标本中发现形成特征性多芽体的大型（常>15μm）酵母菌。

　　 2、真菌培养 在葡萄糖蛋白胨琼脂上25℃，呈菌丝型生长，生长慢，菌落小。镜检可见1～2μm宽的分隔分支菌丝，在菌丝两侧有圆形或卵圆形3～6μm大小的侧生小分生孢子，类似皮炎芽生菌。在血琼脂或脑心葡萄糖血琼脂37℃，呈酵母型生长，镜检与直接涂片所见相同。

　　 3、血清学试验 可检测抗体和抗原。有免疫扩散法和补体结合法。

　　 4、肺部X线检查 损害常位于肺的下野，多为双侧。损害可呈结节状、浸润性或条纹状。结节可以分散，也可融合。浸润可以局限，也可弥散。一般肺部病变未见有钙化现象。

　　 5、免疫学检查 包括副球孢子菌素皮试、补体结合试验等。免疫试验有时与其他系统性真菌病如皮炎芽生菌病等发生交叉反应，因此阳性结果不能作为诊断依据。

　　 6、组织病理 以化脓性肉芽肿为主，有中性粒细胞浸润，在脓液的巨细胞中有菌体孢子，多呈单芽性芽生孢子。