使用前除沉淀剂外所有试剂均应在室温下平衡。
（1）标明T（总计数）、NSB（非特异性结合）、A（最大结合）及B到G，标明质控及血样，均作双管。
（2）向NSB及A管中加入100μl0标准品，向B到G管中加入相应试剂100μl，质控及血样均加100μl。
（3）向各试管加入100μl ACTH抗血清（除NSB及T管）混匀。
（4）室温温育60min。
（5）向各管加入100μl ACTH标记物。
（6）4℃温育至少16h。
（7）向各管中加入1ml沉淀剂、混匀。
（8）3000×g离心15min。
（9）用泡沫倾倒架，倾倒上清液，保留沉淀以计数。
（10）1min计数。
注：让试管倒置于吸水纸上10min，轻轻敲击试管，去掉残存液滴。
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