谷胱苷肽的高效液相色谱法检测介绍

　　原理：高效液相色谱法是由于溶质在同定相和流动相之间的分配系数、亲和力、分子大小、吸附能力等不同，而进行连续分离的过程。

　　操作步骤：

　　①色谱条件

　　色谱柱：Kromasil C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm） 。

　　流动相：磷酸二氢钠和辛烷磺酸钠混合溶液（磷酸二氢钠3.0 g、辛烷磺酸钠1.0 g，加水溶解并定容至500 mL，用磷酸调溶液pH为3）：乙腈 = 96：4（体积比）。

　　检测波长：210 nm，流速0.8 mL/min，柱温30℃，进样量10 μL 。

　　②制作标准溶液

　　准确称取谷胱甘肽标准品适量，用去离子水溶解于容量瓶中，混合均匀，定容，制成25 μg/mL、50 μg/mL、100 Vg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL、800 μg/mL系列浓度样品液，作为标准溶液。

　　③样品制备

　　准确称取谷胱甘肽样品，加去离子水，混合均匀，制成浓度为25 ~ 800 μg/mL的样品溶液，作为分析溶液。

　　④绘制标准曲线

　　将配置的谷胱甘肽标准液，分别吸取10 μL进样测定，以谷胱甘肽谷胱甘肽生产技术浓度和峰面积绘制其标准曲线，根据标准曲线得出该曲线的回归方程。峰面积的变化应与谷胱甘肽的质量浓度呈线性关系，其拟合度应达0.9995以上。

　　⑤样品的测定

　　取谷胱甘肽样品分析液10 μL，用高效液相色谱仪进样测定，得到样品溶液的峰面积，根据回归方程计算出谷胱甘肽的含量。