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关于siRNA表达框架的介绍

2022.10.04
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coco5517

认真做好每一件喜欢的事,把每一件要做的事都变成喜欢并认真去做的事

  siRNA表达框架(siRNA expression cassettes,SECs)是一种由PCR得到的siRNA表达模版,包括一个RNA pol Ⅲ启动子,一段发夹结构siRNA,一个RNA pol Ⅲ终止位点,能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是,SECs不需要载体克隆、测序等颇为费时的步骤,可以直接由PCR得到,不用一天的时间。因此,SECs成为筛选siRNA的最有效工具,甚至可以用来筛选在特定的研究体系中启动子和siRNA的最适搭配。如果在PCR两端添加酶切位点,那么通过SECs筛选出的最有效的siRNA后,可以直接克隆到载体中构建siRNA表达载体。构建好的载体可以用于稳定表达siRNA和长效抑制的研究。

  这个方法的主要缺点是

  ①PCR产物很难转染到细胞中(晶赛公司的Protocol可以解决这一问题)

  ②不能进行序列测定,PCR和DNA合成时可能差生的误读不能被发现导致结果不理想。

  最适用于:筛选siRNA序列,在克隆到载体前筛选最佳启动子

  不适用于:长期抑制研究。(如果克隆到载体后就可以了)

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