（1）抗原片制备：Nichols株梅毒螺旋体（每高倍视野20条）抗原悬液，在玻片上涂数个直径为5mm的菌膜，干后以甲醇固定。
（2）待检血清预处理：待检血清先经56%30分钟灭活，取50ul血清与200ul吸附剂（Reiter株非致病密螺旋体）混匀，37℃作用30分钟，以充分吸除非特异性抗体。
（2）夹心法荧光显色：吸附后的待检血清用磷酸盐缓冲液（PBS）作1；20—1:320的倍比稀释，将稀释后的血清分别滴加于抗原菌膜上，置湿盒内37℃孵育30分钟，然后用PBS洗片，并将玻片在PBS中浸洗，换液3次，每次5分钟，吹干。各抗原反应片上滴加工作浓度荧光素标记的羊抗人lgG抗体，置湿盒37℃孵育30分钟，再用PBS按前法洗片，干后用甘油缓冲液封片。
（3）荧光显微镜观察：每次实验设阳性、阴性、非特异性血清对照。阴性标准血清无荧光菌体或偶尔见荧光菌体出现：阳性对照可见多数（高倍视野15条）荧光菌体出现。并以此为参照作出待检标本的判定。
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