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(1)碱基要随机分布,且与模板内部序列没有较高的相似性。
(2)引物自身及两引物之间不应存在互补序列(少于5个相同的碱基连续排列)。
(3)引物长度一般在15-30个碱基之间。过长会导致延伸温度大于74℃,不适于Taq酶进行反应。