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qRT-PCR的模版需求

2022.10.19
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zhaoqisun

致力于为分析测试行业奉献终身

通常而言,如果你想做一个突变体鉴定实验,那么模版质量要求可适当放宽,只要cRNA反转录成功即可。但如果你要做一个厉害的标记基因鉴定,并且想要达到传说中“三线合一”的境界,那么模版质量就另当别论了。

首先,RNA要经过严格的定量(因为反转成cDNA后,反转时加入的dNTP会严重干扰定量结果,因此对cDNA定量是没有意义的)。尽量取等量的、未降解的RNA进行反转录(并选择含有DNAase的试剂盒)。

反转好的cDNA模版需一次性稀释20-30倍,不可长期保存,每次用时前先混匀再离心。qRT-PCR实验最好在一个星期内完成。

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