1,操作时戴手套,严禁用手接触凝胶和硝酸纤维素膜,
2,转移时,滤纸与膜、膜与凝胶、凝胶与滤纸桥之间均不能有气泡,否则影响DNA转移,
3,凝胶易碎,操作时应格外小心,
4,硝酸纤维素膜上的DNA固定非常重要,固定不好时DNA·在杂交过程中会脱落下来,烤膜温度过高,膜脆性增加,易碎,
5,大片段DNA转移效率低,可在碱变性前用0.25mol/L HCl浸泡凝胶10,15分钟,使DNA分子脱嘌呤或用短波(260mm)紫外光照射10,20分钟后再行碱变性、转移以提高大片段DNA的转移效率。
6,转移液中盐离子浓度对转移有较大影响。10×SSC条件适中,能有效地转移 1,20kb的DNA片段,速度也比20×SSC快,比较常用,6×SSC转移速度最快,·对于高分子量DNA片段(>10kb)的转移较理想,但小分子DNA易丢失。若转移DNA片段较小 ,则宜选用20×SSC。因此应根据不同目的选择适当的转移液。
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