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血清醛缩酶的检查过程

2022.11.16
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xujinping

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  1、比色法:

  ①0.1mol/L三甲基吡啶缓冲液(pH7.4):称2,4,6-三甲基吡啶1.21g或吸取1.32ml,溶于蒸馏水50ml中,用1mol/L HCl调pH至7.4(约3~4ml),并稀释至100ml。因三甲基吡啶易挥发,应经常校pH。

  ②0.56mol/L硫酸肼溶液(pH7.4):称硫酸肼(NH2-NH2·H2SO4)7.29g,溶于60ml 1mol/L NaOH中,调pH至7.4,用水稀释至100ml。

  ③2mmol/L碘醋酸溶液(pH7.4):称碘醋酸37mg,溶于0.1mol/L NaOH 2ml中,用水稀释至100ml。

  ④50mmol/L 1,6-二磷酸果糖底物液(pH7.4):称取1,6-二磷酸果糖二钠盐384mg,溶于10ml蒸馏水中,用1mol/L NaOH调pH至7.4,以蒸馏水稀释至20ml。冰箱保存可用2周。

  ⑤100g/L三氯乙酸。

  ⑥0.75mol/L NaOH溶液。

  ⑦1g/L DNPH溶液:称取DNPH 100mg,用2mol/L HCl溶解并稀释至100mL。

  ⑧2g/L二羟丙酮贮存标准液:准确称取二羟丙酮200mg,用蒸馏水溶解并稀释至100ml,置冰箱中48~72h充分解聚后使用。

  ⑨0.2g/L二羟丙酮应用标准液:将贮存标准液用蒸馏水做10倍稀释。

  2、酶偶联法:

  ①底物缓冲液:称220mg Na2FDP·8H2O(或370mg三环已氨FDP·H2O),6.2mg碘醋酸,溶于90ml蒸馏水中,加入0.75ml 2,3,6-三甲基吡啶,混合,用5mol/L HCl调pH至7.4(约0.6ml),用蒸馏水稀释至100ml。2~8℃可稳定4周。此液含三甲基吡啶55mmol/L,碘醋酸0.3mmol/L,FDP 4mmol/L。

  ②15mmol/L NADH溶液:称25mg Na2NADH及20mg NaHCO3,溶于2ml蒸馏水中,2~8℃稳定4周。

  ③GDH/TPI/LDH悬液(Boehfinger Mannheim公司产品):用3.2mol/L硫酸铵溶液稀释成混合酶溶液,使各酶浓度为甘油-1-磷酸脱氢酶(GDH)>75KU/L、磷酸丙糖异构酶(TPI)>500KU/L,乳酸脱氢酶(LDH)>233 KU/L(25℃),2~8℃均可稳定1年,用前充分混匀。

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