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血清乳酸脱氢酶的注意事项及检查过程

2022.11.17
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xujinping

致力于为分析测试行业奉献终身

  注意事项

  (1)比色法:

  ①乳酸钾、乳酸钠也可作为LDH底物,但因其为水溶液,含量不够准确,且保存不当易产生酮酸类物质,抑制酶促反应。而乳酸锂为固体,稳定,易于称量。

  ②除二乙醇胺缓冲液外,也可用Tris或焦磷酸缓冲液,避免了原金氏法中甘氨酸缓冲液对LDH的抑制作用,提高了阳性检出率。

  ③比色应在5~15min内完成,否则吸光度降低。

  ④结果>2500U时,可用生理盐水稀释标本后再测,其结果乘以稀释倍数。

  (2)连续监测法:

  ①标本勿溶血,当溶血达Hb 0.8g/L时,LDH活性可升高58%。

  ②标本于室温(25℃)保存,2天内酶活性稳定,冰箱保存酶活性降低,-20℃过夜LDH3、LDH4则全部失活。

  ③用血清或肝素抗凝血浆测定结果满意,草酸盐可抑制LDH活性。

  ④复溶后溶液变浊或初始吸光度>0.5应弃去。

  ⑤利用正逆双向反应均可测定乳酸脱氢酶活性,但因反应温度、底物和缓冲液浓度不同,其参考区间也有差异。以乳酸和NAD为底物,在340nm监测吸光度增高速率为正向反应,以LD-L表示;以丙酮酸和NADH为底物,监测340nm吸光度下降速率为逆向反应,以LD-P表示。正逆反应两法相比,LD-L法的主要优点是:A.正向反应底物液的稳定性比逆向反应的稳定性大,前者冰箱可保存6个月以上,而后者仅几天;B.速率反应的线性范围(吸光度对监测时间t作图)较宽;C.重复性比LD-P好。由于逆向反应速度比正向反应速度快,其参考值约为LD-L的2倍。

  检查过程

  静脉采血后立即送检,检测方法:

  (1)比色法:

  混匀,室温放置5min后,在440nm波长,比色杯光径1.0cm,蒸馏水调零点,读取各管吸光度,以AU-AC之差值查标准曲线,求出LDH活力单位。

  (2)连续监测法:

  各实验室可根据本室生化自动仪型号及说明书操作。主要参数为340nm波长,37℃,吸样量500μl,连续监测时间60s,标本与试剂体积之比为1∶50。

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