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第一有可能质粒的双链DNA破碎了，看来是你第一步重悬的过程对DNA造成一定程度的损害了，按说2000rpm，5min沉淀菌体，然后再加I液重悬，震荡1min就应该搞定的，顶多2min；第二种可能就是RNA没有除干净，拖尾的就是小分子的RNA片段，试着多加点RNA酶吧
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