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尿素在纯化包涵体时用,一般用8M的尿素加到含有咪唑的磷酸缓冲液中,纯化可溶性蛋白时不用加尿素。洗杂蛋白时咪唑的浓度一般是20mM。洗脱目的蛋白时咪唑浓度在500mM时能将大部分蛋白都洗脱下来,如果想让蛋白纯度高的话,可以用不同的咪唑浓度,设置成梯度进行洗脱,我们实验室一般是80mM,100mM,200mM,500mM,但是用梯度洗脱有个缺点就是可能你的目的蛋白被稀释,浓度降低。