（1）事先做好两种原生质体融合的识别标记，如色素、缺陷型、抗性标记等。
（2）原生质体或细胞密度应在105个/ml，两种原生质体或细胞按1：1等量混合
（3）PEG诱导融合的效果，同分子量大小及浓度高低密切相关。分子量和浓度愈大，促进细胞融合的能力愈高，而其粘度及对细胞的毒性也随之增大，故通常以选用分子4000-6000浓度30-50%的PEG进行融合为宜。
（4）PEG使细胞融合或致死剂量界限很狭小，为达到成功有效的融合，还必须严格掌握PEG的处理时间。一般加入PEG后，24℃培育10-20min（注意时间宜短不宜长，过长使原生质体周围包裹一层膜形成凝集体，降低融合率），缓缓加入高钙离子溶液15min后用冲洗液清洗，离心收集细胞或原生质体。
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