（1）髂骨穿刺抽取少许骨髓，制成涂片，染色后镜检。此法的利什曼原虫检出率约在85%左右。合并HIV感染的利什曼病患者，检出率可达98%。
（2）脾脏穿刺吸出脾髓，针头拔出后，即将针头内的脾髓注射于玻片上，制成涂片，染色镜检。脾穿刺法的原虫检出率很高，可达95%左右。
（3）淋巴结穿刺淋巴液制成涂片，染色镜检。该法对初诊病人而言，原虫的检出率一般为50%左右，但合并HIV感染的利什曼病患者，检出率可达100%。
（4）皮肤刮片检查制成涂片后染色镜检。如是PKDL，一般都能查见利什曼原虫。
（5）原虫培养在严格的无菌操作下，把可疑病人的骨，脾、淋巴结或皮肤损害内所取得的各种组织液置三恩培养基内，放入22～240C温箱内培养。15天后用白金耳取少量培养液于玻片上，在光学显微镜（高倍）下检查，如查见利什曼原虫前鞭毛体，即可确定诊断。
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